Hotline: 096 302 9988

Hỗ trợ: 096 302 9988

sales@hoachat.com.vn

Nguyên tắc của phương pháp HPLC

22/07/2021

HPLC là tên viết tắt của High Performance Liquid Chromatography - phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao, trước đây còn được gọi là High Pressure Liquid Chromatography - phương pháp sắc ký lỏng cao áp. Để hiểu rõ hơn các vấn đề liên quan đến phương pháp HPLC, các bạn hãy cũng chúng tôi đón đọc nội dung bài viết dưới đây nhé.

HPLC là gì?

HPLC là gì?

HPLC là gì?

HPLC hay phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao là một kỹ thuật phân tích dùng để tách, xác định và định lượng các thành phần trong một hỗn hợp nào đó. Đây là một phương pháp chia tách mà trong đó, pha động là chất lỏng còn pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất rắn, thậm chí là một chất đã được biến đổi bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ. 

Phương pháp này ra đời vào năm 1967-1968 và là một dạng sắc ký lỏng cột được cải tiến dựa trên cơ sở là sự phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cổ điển. Đó là để dung môi chảy với áp suất cao, lên tới 400 atm thay vì chảy dưới áp suất của trọng lực, nhờ đó mà tốc độ chảy của dung môi pha động cũng tăng lên.

Hiện nay, nó là kỹ thuật sắc ký cao nhất và được ứng dụng cho hầu hết các phòng thí nghiệm trên toàn thế giới vì có độ nhạy cao, khả năng định lượng tốt, thích hợp tách các hợp chất khó bay hơi cũng như các hợp chất dễ phân hủy bởi nhiệt.

HPLC là gì?

HPLC - sắc kí lỏng là gì?

Nguyên tắc của phương pháp HPLC

HPLC hoạt động với nguyên tắc là tách một mẫu gồm hỗn hợp nhiều thành phần thành các bộ phận cấu thành nên nó dựa trên sự khác biệt về ái lực giữa các phân tử khác nhau với 2 pha là pha động và pha tĩnh (được sử dụng trong quá trình tách).

Nguyên tắc của hương pháp hplc

Nguyên tắc của hương pháp hplc

Các thành phần chính của hệ thống HPLC

1. Dung môi

Pha động hoặc dung môi của hệ thống HPLC thường là hỗn hợp các chất lỏng phân cực và không phân cực có nồng độ tương ứng và sẽ thay đổi tùy thuộc vào thành phần của mẫu. Chúng được chứa trong một resorvoir thủy tinh.

2. Bơm - Bộ phận dùng để phân phối dung môi

Một máy bơm hút pha động từ resorvoir chuyển nó đi qua cột và bộ phát hiện hệ thống. Tùy vào các yếu tố như kích thước cột, kích thước hạt của pha tĩnh, tốc độ của dòng chảy dung môi và thành phần của pha động mà áp suất vận hành được tạo ra có thể lên tới 42000 kPa (khoảng 6000 psi).

3. Bộ tiêm mẫu 

Bộ tiêm mẫu có thể là một mũi tiêm đơn hoặc một hệ thống tiêm tự động. Một kim phun trong hệ thống HPLC cho phép tiêm mẫu chất lỏng trong phạm vi 0,1 - 100 ml thể tích với độ tái lập cao dưới áp suất cao (có thể đạt đến 4000 psi).

4. Cột

Cột sắc ký thường được làm bằng thép không gỉ đánh bóng, dài từ 50 - 300 mm và có đường kính trong từ 2 - 5 mm. Các cột có đường kính trong nhỏ hơn 2 mm được gọi là cột microbore.

Cột sắc ký thường chứa đầy một pha đứng yên và điều kiện phân tích lý tưởng nhất chính là nhiệt độ của pha động và cột sắc ký được giữ không đổi trong suốt quá trình phân tích.

5. Đầu dò - Detector

Đầu dò HPLC nằm ở cuối cột sắc ký để phát hiện các chất phân tích sau khi chúng được rửa giải từ cột. Các máy dò này thường là máy quang phổ UV, máy quang phổ huỳnh quang, máy quang phổ khối và máy điện hóa.

6. Thiết bị thu thập dữ liệu

Tín hiệu từ đầu dò có thể thu thập được trên máy ghi biểu đồ hoặc bộ tích hợp điện tử sẽ khác nhau về độ phức tạp, khả năng xử lý, lưu trữ và xử lý lại dữ liệu sắc ký. Máy tính sẽ tích hợp phản ứng của đầu dò với từng thành phần và đặt nó vào máy sắc ký để dễ đọc và dễ diễn giải.

Nguyên tắc của phương pháp hplc

Các thành phần chính của HPLC

Cách hoạt động của HPLC

Trong phương pháp HPLC, một máy bơm sẽ đẩy dung môi hay pha động đi qua cột dưới áp suất cao (có thể lên đến 400 atm). Chất hấp phụ ở đây thường là vật liệu dạng hạt được làm từ các hạt rắn như silica hoặc polyme.

Nhờ có áp suất cao mà thời gian xử lý mẫu diễn ra nhanh hơn nhiều so với sắc ký cột cổ điển. Điều này cho phép chúng ta sử dụng các chất hấp phụ có kích thước hạt nhỏ hơn để làm tăng diện tích bề mặt tương tác giữa pha tĩnh và các phân tử chảy qua nó. Nhờ đó mà việc phân tách các thành phần của hỗn hợp tốt hơn.

Dung môi được sử  trong phương pháp HPLC thường là hỗn hợp các dung môi như nước, acetonitrile và/hoặc methanol.

Các thành phần của hỗn hợp được tách khỏi nhau vì mức độ tương tác của chúng với các hạt hấp thụ là khác nhau. Điều này làm cho tốc độ rửa giải của các chất trong hỗn hợp là khác nhau và tạo nên sự phân tách các thành phần khi chúng ra khỏi cột. So với sắc ký cột cổ điển, HPLC có tính tự động hóa cao hơn và độ nhạy cũng tốt hơn rất nhiều.

Đó là những thông tin về phương pháp HPLC mà chúng tôi muốn giải đáp giúp các bạn. Để xem thêm nhiều bài viết hơn nữa, vui lòng truy cập website https://ammonia-vietchem.vn/ và theo dõi chi tiết nhé.

Đánh giá - Bình luận
Nhận xét đánh giá

Không được bỏ trống

Không được bỏ trống

Không được bỏ trống

Danh mục tin tức

Vui lòng đợi

Chúng tôi sẽ liên hệ tới bạn sớm nhất có thể

Có lỗi hệ thống, vui lòng thử lại sau, xin cảm ơn!.

096 302 9988